中性粒细胞是血液中数量最多的白细胞，约占成人外周血白细胞的60-70%，小鼠中约为10-25%，是先天免疫的重要组成部分。中性粒细胞具有高度的异质性和可塑性，在体内发挥着多种看似矛盾的保护与致病作用，是一把“双刃剑”。一方面中性粒细胞是抗菌防御的重要效应细胞，通过吞噬、脱颗粒作用和形成胞外陷阱（NET）等方式消灭潜在病原体，另一方面它们在组织修复、纤维化相关的致病过程中发挥关键功能[1,2]。
中性粒细胞在肿瘤微环境中也扮演着复杂的角色，它们可以直接释放活性氧、金属蛋白酶等毒性物质或调节凋亡相关配体来消除肿瘤细胞，激活免疫系统间接抑制肿瘤进展，但同时自己也经历重编程，促进肿瘤免疫逃逸、血管生成和肿瘤生长[2-4]。中性粒细胞多样而复杂的功能，使其成为近年免疫学研究的一大热点，已经有多项在研的癌症免疫疗法靶向中性粒细胞[2-4]。
图1 截至2024年12月31日，在PubMed用 “neutrophil” 检索到的文献数量，2020年开始激增。
中性粒细胞存活时间短，更新速度快，增加了研究的技术难度。近年来单细胞分析技术的发展推动了对中性粒细胞异质性的深入研究。而要在体内证明是中性粒细胞起作用，一种广泛使用的经典方法是给实验动物，比如小鼠注射Ly6G抗体，在体内清除中性粒细胞，再进一步进行功能检测，比如检测清除中性粒细胞对肿瘤体积的影响。
小鼠Ly6G是一种糖基化的磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白，通常在单核细胞发育过程中瞬时表达，而在成熟粒细胞和外周血中性粒细胞持续表达。其1A8单克隆抗体特异性地与小鼠Ly6G反应，被广泛用于体内中性粒细胞清除[5]。
表1 小鼠Ly6G抗体1A8比Gr-1抗体RB6-8C5更特异地在体内清除中性粒细胞，对循环淋巴细胞影响较小[5]。
Bio X Cell公司具有超过25年的单克隆抗体及重组蛋白的生产和定制经验，提供高纯度、低内毒素、无防腐剂的单克隆抗体，适用于各种临床前功能实验，尤其是动物体内研究。
Bio X Cell提供的两种小鼠Ly6G抗体克隆1A8产品，InVivoMAb anti-mouse Ly6G（#BE0075-1）和InVivoPlus anti-mouse Ly6G（#BP0075-1），据CiteAb网站数据，截至2024年底，已分别被296篇和88篇文献引用，展现了良好的中性粒细胞体内清除效果。两者纯度都大于95%，且经过0.2μm过滤，消除内毒素和叠氮化合物的影响。InVivoPlus系列内毒素更低至1EU/mg以下（InVivoMAb为<2EU/mg），而且额外经过生物学结合验证、小鼠病原体检测和单体率检测。
这里选取三篇2024年的高分文献，介绍Ly6G抗体在小鼠体内清除中性粒细胞的具体应用和研究发现，以供参考。
CD49f高表达肝癌细胞亚群免疫逃逸机制[6]
来自上海交通大学医学院附属仁济医院-上海市肿瘤研究所覃文新研究员/王存研究员团队和复旦大学附属中山医院高强教授团队的Cancer Cell论文。
研究人员首先鉴定到CD49f是肝细胞癌中肿瘤起始细胞（TIC）的一个显著的标志物，发现CD49f高表达TIC通过CXCL2-CXCR2轴特异性招募中性粒细胞形成免疫抑制微环境。
图2 第一行从左至右，实验流程示意，极限稀释法检测Hep53.4细胞致瘤潜能，以及CD49f+GFP+细胞的占比。第二行，流式细胞分析验证C57BL/6小鼠外周血和肿瘤中的中性粒细胞清除效率（每组n=6只小鼠）。
中性粒细胞胞外陷阱形成的调控机制[7]
这项发表在Nature上的研究发现髓样抑制性C型凝集素样受体（MICL）是NET的重要模式识别受体，MICL识别NET后能够抑制中性粒细胞活化和NET的进一步形成，高水平的MICL自身抗体可能与类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病进展相关。
研究人员用Micl-/-小鼠构建了CAIA（collagen antibody-induced arthritis）的RA模型，Micl敲除小鼠出现了增强以及非缓解的关节炎表型，流式分析发现其关节组织中浸润的中性粒细胞特异性增多而且高度活化。
图3 上图, CAIA模型中性粒细胞清除策略。左下图, 流式细胞术定量检测第9天外周血中的中性粒细胞（CD45+CD11b+F4/80-SSChigh），1次实验每组3只小鼠。右下图，小鼠的严重程度评分，1次实验每组5只小鼠。
中性粒细胞来源迁移体在凝血中的关键作用[8]
来自清华大学生命科学学院俞立教授团队。迁移体是俞立团队发现并命名的迁移细胞的细胞器，近期这篇Nature Cell Biology论文报道了迁移体在凝血中的新功能。
作者发现人和小鼠血液中存在大量中性粒细胞来源的迁移体，这些迁移体表面吸附和富集凝血因子，还高度富集粘附分子，能够迅速聚集到损伤部位激活血小板促进凝血反应。
图4 第一行, 小鼠全血细胞流式分析，以及中性粒细胞来源迁移体成像流式分析验证中性粒细胞清除。第二行，清除中性粒细胞或血小板之后小鼠尾尖出血量增加。第三行，注射中性粒细胞来源迁移体恢复中性粒细胞清除小鼠的凝血。
要确定具体实验中合适的抗体剂量和给药频率，需要考虑多种因素，比如小鼠品系年龄体重、疾病模型、研究期限以及环境因素等等，克隆1A8清除中性粒细胞的单次给药剂量通常在7.5mg/kg到20mg/kg之间，可以参阅Bio X Cell产品丰富的引用文献并进行预实验评估。
其次需要设置同型对照组消除背景，并进行流式细胞分析，检测体内的清除效率。Bio X Cell为两个系列的Ly6G抗体分别提供同系列的同型对照，InVivoMAb rat IgG2a isotype control（#BE0089）和InVivoPlus rat IgG2a isotype control（#BP0089）。
另外，2024年Science Immunology上的一项研究基于甲流病毒诱导的肺损伤模型鉴定了一群表达Ly6G的非典型巨噬细胞，打破了在成熟细胞中Ly6G表达限于粒细胞的惯有认知[11]。
图5 小鼠Ly6G抗体（#BE0075-1）1：1500稀释在KrasLSL-G12D/+;Trp53fl/fl（KP）和KrasFSF-G12D/+;Trp53Frt/Frt;Rosa26FSF-CreERT2;Nkx2-1fl/fl（KPN）小鼠肿瘤FFPE切片中的IHC图像和阳性细胞定量[12]。
图6 小鼠Ly6G抗体（#BE0075-1）1：2000稀释用于寄生虫感染的小鼠肺组织冰冻切片IF实验图像[13]。
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参考文献
1. Herro, R, et al (2024) The diverse roles of neutrophils from protection to pathogenesis. Nat Immunol. 25(12):2209-2219. doi: 10.1038/s41590-024-02006-5.
2. Zhang, F, et al (2024) Neutrophil diversity and function in health and disease. Signal Transduct Target Ther. 9(1):343. doi: 10..1038/s41392-024-02049-y.
3. Huang, X, et al (2024) Neutrophils in cancer immunotherapy: friends or foes? Mol Cancer. 23(1):107. doi: 10.1186/s12943-024-02004-z.
4. Ng, M, et al (2025) Adaptation of neutrophils in cancer. Immunity. 58(1):40-58. doi: 10.1016/j.immuni.2024.12.009.
5. Daley, JM, et al (2008) Use of Ly6G-specific nonoclonal antibody to deplete neutrophil in mice. J Leukoc Biol. 83(1):64-70. doi: 10.1189/jlb.0407247.
6. Yang, C, et al (2024) Targeting the immune privilege of tumor-initiating cells to enhance cancer immunotherapy. Cancer Cell. 42(12):2064-2081. doi: 10.1016/j.ccell.2024.10.008.
7. Malamud, M, et al (2024) Recognition and control of neutrophil extracellular trap formation by MICL. Nature. 633(8029):442-450. doi: 10.1038/s41586-024-07820-3.
8. Jiang, D, et al (2024) Neutrophil-derived migrasomes are an essential part of the coagulation system. Nat Cell Biol. 26(7):1110-1123. doi: 10.1038/s41556-024-01440-9.
9. Gungabeesoon, J, et al (2023) A neutrophil response linked to tumor control in immunotherapy. Cell. 186(7):1448-1464. doi: 10.1016/j.cell.2023.02.032.
10. Hirschhorn, D, et al (2023) T cell immunotherapies engage neutrophils to eliminate tumor antigen escape variants. Cell. 186(7):1432-1447. doi: 10.1016/j.cell.2023.03.007.
11. Ruscitti, C, et al (2024) Recruited atypical Ly6G+ macrophages license alveolar regeneration after lung injury. Sci Immunol. 9(98):eado1227. doi: 10.1126/sciimmunol.ado1227.
12. Mollaoglu, G, et al (2018) The lineage-defining transcription factors SOX2 and NKX2-1 determine lung cancer cell fate and shape the tumor immune microenvironment. Immunity. 49(4):764-779. doi: 10.1016/j.immuni.2018.09.020.
13. Mabille, D, et al (2022) Impact of pulmonary African trypanosomes on the immunology and function of the lung. Nat Commun. 13(1):7083. doi: 10.1038/s41467-022-34757-w.
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