辅助性T细胞17（T helper 17 cell, Th17）作为一类独特的CD4+T细胞亚群，最显著的特点是分泌IL-17家族细胞因子。Th17的特异性转录因子为RORγt/RORC2，区别于T-bet（Th1）和GATA3（Th2），其独特定位功能为抗真菌/胞外菌+驱动自身免疫和慢性炎症，它自2005年被发现以来便成为免疫研究的热点。

2025年5月，北京协和医院风湿免疫科李梦涛主任团队与浙江大学杨隽研究员团队合作，揭示了Activin A/ALK4信号通路在Th17细胞和肺血管内皮细胞中的双重作用机制，为红斑狼疮相关肺动脉高压的治疗提供了新靶点。

研究团队设计了Th17细胞与肺血管内皮细胞共培养体系，发现当Th17细胞过表达Activin A的受体ALK4时，可强力诱导内皮细胞发生内皮-间质转化——这是肺血管重塑的核心病理过程^[1]。

四川大学华西医院张敦房研究员团队的突破性研究，揭示了过继性Treg细胞治疗会促进致病性Th17细胞的分化和积累，进而影响Treg细胞治疗的疗效，并且提出了创新性治疗方案——在输注Treg细胞的同时阻断IL-6/STAT3信号通路。这种联合治疗策略可通过抑制Treg细胞介导的致病性Th17细胞分化，显著提升Treg细胞治疗的疗效^[2]。

浙江大学医学院蔡志坚/沈颖颖团队的研究发现了新的诱导肠道Th17细胞生成的细菌——粪产碱菌。

值得注意的是，粪产碱菌在人类生活环境中的普遍存在，团队发现该菌在成人粪便的检出率高达86%（86/100），而此前被认为是诱导肠道Th17细胞主要细菌的分节丝状菌在成人粪便中的检出率为0%（0/100）^[3]。

Th17 细胞在人和小鼠中的分化路径^[4]

利用密度梯度离心液将全血样本中的PBMC离心出来

1. 1 使用CD4+ Naive T细胞分选试剂标记PBMC。一般来说，需在4℃下孵育20-30 min。

2. 2 加入链霉亲和素（Streptavidin）偶联的磁珠，在4℃下继续孵育20-30 min。

3. 3 将孵育用的U型管置于专用磁力架上，室温静置5 min。

4. 4 将管中的细胞导入新的U型管中，即为Naive T细胞。

5. 5 为确保纯度，可以重复分选步骤。

1. 1 使用PBS稀释抗CD3(Cat.No.:GMP-A018)和抗CD28抗体(Cat.No.:GMP-A063），稀释至工作浓度分别5-10 µg/mL和5-10 µg/mL。

2. 2 按照1 mL/孔加稀释后的抗CD3/CD28抗体至24孔板，37℃细胞培养箱中孵育60 min（在4℃过夜孵育效果更佳）。

3. 3 使用PBS将包被后的孔清洗两次。

   注意：也可使用抗CD3/CD28磁珠(Cat.No.:GMP-B016)进行激活，在细胞铺板时，按照磁珠和细胞1:1的比例进行混合即可。

Expansion of the human PBMCs. Cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016) , and expanded with human IL-2 (Cat.No.:C013) for 14 days.(Data were kindly provided by Novoprotein's customer. Thanks for her contribution)

4. 4 配置Th17分化培养基（Th17-DM）

• RPMI 1640完全培养、β-巯基乙醇 (50 μM)

• 细胞因子

  

• 抗体： 抗人IFN-γ抗体 (10 μg/mL) + 抗人IL-4抗体 (10 μg/mL)

  注意：成分确定的T细胞无血清培养基可以替代RPMI 1640完全培养基（含血清），该类培养基的批次稳定性较含血清培养基要好。

5. 5 使用Th17-DM重悬分选后的Naive T细胞，将浓度调整以2×10⁵ cells/mL。

6. 6 按照1 mL/孔的量加入已包被抗CD3/CD28抗体的24孔板中，在37℃，5%CO₂的环境下持续培养7天。每1~2天进行半换液。

1. 1 取部分Th17细胞，用含有50 ng/mL PMA的Th17-DM重悬，并于细胞培养箱中孵育1 h。

2. 2 加入3.0 μM蛋白转运抑制剂Monensin，继续培养3 h。

3. 3 使用流式细胞术对细胞进行鉴定。

4. 4 胞外标志物：CD4、TGF-βR、IL-6 Rα、IL-21R、IL-23R

   胞内/核内标志物：IL-17A、RORα/NR1F1、RORγt/RORC2/NR1F3

近岸蛋白提供T细胞体外激活培养以及Th17细胞分化的所需的抗体、人源和鼠源细胞因子，包括IL-2、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β1、抗CD3抗体、抗CD28抗体等，并能提供批间稳定一致的GMP级产品，支持向临床无缝过渡转化。